免疫荧光 单标染色 | 货号 | 1561 |
应用 | 病理检测 |
实验周期 | 2-3个工作日 |
价格 | 80.00¥/张 |
石蜡切片免疫组化实验步骤:
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ6min- 无水乙醇Ⅱ6min-Ⅱ-95%乙醇6min-85%乙醇6min-75%乙醇6min-双蒸水2min。
2、抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸(PH6.0)抗原修复液的高压锅内进行抗原修复,喷气计时2.5min, 自然冷却后将玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 5min。
3、 BSA 或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用 5%BSA,室温封闭 1h。
4、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内 4°C 孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
5、 加二抗:玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 8min。切片稍甩干后在圈内滴加与种属对应的二抗,覆盖组织,室温孵育120min。之后玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 8min。
6、 DAPI染核:滴加 DAPI,室温孵育10min,之后玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 6min。
7、 封片:甘油封片。
8、荧光显微镜观察