1、细胞培养上清
将细胞培养上清液吸入离心管中,在2-8℃下以1000×g离心20分钟,除去细胞碎片和杂质,收集上清液备用,样本保存在-20℃或-80℃,避免反复冻融。
2、细胞提取液
1) 吸出培养板中的培养基,用胰蛋白酶消化细胞,然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。悬浮细胞可以省略该步骤。
2) 将细胞悬浮液收集到离心管中,在2-8℃下以1000×g离心5分钟,然后吸去培养基,用预冷PBS洗涤细胞3次。
3) 加入适量的预冷PBS(建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。在6孔培养板(约1×106个细胞)中,每个孔加入150-250μL的PBS来重悬细胞。
4) 使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融,重复冻融过程数次,直至细胞完全裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。
5) 2-8℃下以1500×g离心10分钟,去除细胞碎片,收集上清液,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
以上内容仅供参考