免 疫 组 化 | 货号 | 0021 |
| 应用 | 病理检测 |
| 实验周期 | 2-3个工作日 |
| 价格 | 30.00￥/张 |
石蜡切片免疫组化实验步骤：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ6min- 无水乙醇Ⅱ6min-Ⅱ-95%乙醇6min-85%乙醇6min-75%乙醇6min-双蒸水2min。
2、抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸（PH6.0)抗原修复液的高压锅内进行抗原修复，喷气计时2.5min， 自然冷却后将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
3、阻断内源性过氧化物酶：切片放入0.3%甲醇过氧化氢溶液，室温避光孵育 20 min，将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
4、BSA 或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用 5%BSA，室温封闭 1h。
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内 4°C 孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）
6、加二抗：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 8min。切片稍甩干后在圈内滴加生物素偶联的二抗，覆盖组织，室温孵育 50min。之后玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 8min。切片稍甩干后在圈内滴加HRP标记的链霉卵白素的三抗，覆盖组织，室温孵育 50min。之后玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 8min。
7、DAB 显色：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的 DAB 显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色， 自来水冲洗切片终止显色。
8、复染细胞核：Harris 苏木素复染 3min 左右，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，流水反蓝。
9、脱水封片：将切片依次放入 75%酒精 6min-85%酒精 6min --无水乙醇Ⅰ6min -无水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ7min -二甲苯Ⅱ7min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。1010、显微镜镜检，图像采集分析。
石蜡切片免疫组化结果判读：苏木素染细胞核为蓝色，DAB 显出的阳性表达为棕黄色
