一、概述
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学检测方法，常用于检测抗原-抗体反应。其基本原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后加入酶标二抗，最后通过底物显色反应，根据颜色变化来检测抗原-抗体反应的存在。ELISA试剂盒是一种方便快捷的免疫检测工具，可用于定性或定量分析样本中的抗原或抗体。
二、实验原理
1. 抗原-抗体反应
ELISA的基础是抗原-抗体反应。抗原是一种能够与抗体结合的物质，而抗体则是免疫系统产生的蛋白质，能够识别并结合抗原。抗原-抗体结合是高度特异的，因此ELISA能够准确地检测样本中的抗原或抗体。
2. 酶联免疫吸附试验
在ELISA中，抗原或抗体被吸附在固相载体表面。常用的固相载体包括聚苯乙烯、尼龙等。载体表面经过特殊处理，可以增强其与抗原或抗体的结合能力。将酶标记的二抗加入反应体系中，二抗能够与抗原或抗体结合，形成酶标抗原-抗体复合物。
3. 底物显色反应
在加入底物后，酶标抗原-抗体复合物与底物发生显色反应，产生颜色变化。底物可以是显色剂，也可以是荧光染料。显色反应的强度与抗原-抗体复合物的量成正比，因此可以通过测量光密度值来定量分析样本中的抗原或抗体。
4. 终止反应
显色反应持续一定时间后，需要加入终止液终止反应。终止液可以使酶失活，停止显色反应。终止液一般是酸或碱溶液。
5. 检测与分析
终止反应后，将固相载体放入多功能酶标仪中测量各孔的光密度值。通过标准曲线可以得出样本中抗原或抗体的浓度。标准曲线是通过检测已知浓度的标准品绘制而成的。
三、实验步骤
1. 包被：将抗原或抗体吸附在固相载体表面。
2. 清洗：清洗未结合的抗原或抗体，去除未结合的部分。
3. 阻断：加入阻断液，封闭载体表面未结合的位点。
4. 清洗：再次清洗未结合的阻断液和未结合的蛋白质。
5. 加样：加入样本和酶标二抗。
6. 孵育：在一定温度下孵育一定时间，使抗原-抗体充分结合并形成酶标抗原-抗体复合物。
7. 清洗：清洗未结合的酶标二抗和未结合的物质。
8. 加底物：加入底物溶液。
9. 孵育：在一定温度下孵育一定时间，使底物与酶标抗原-抗体复合物发生显色反应。
10. 终止反应：加入终止液，停止显色反应。
11. 检测与分析：将固相载体放入多功能酶标仪中测量各孔的光密度值，根据标准曲线得出样本中抗原或抗体的浓度。
