常见的ELISA四种类型
一、直接ELISA法
将抗原与固相载体连接,洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。
二、间接ELISA法
在这种方法中,将已知的抗体与固相载体结合,再与待测样本中的抗原反应,形成抗原-抗体复合物。清洗后,加入酶标记的二抗,与抗原-抗体复合物反应,形成酶标记的抗原-抗体复合物。最后,加入底物显色,根据颜色反应判断结果。
三、双抗夹心法ELISA
双抗夹心法利用抗原抗体特异性结合原理开展双抗体夹心法酶联免疫吸附试验,即通过向预先包被有抗体的微孔中,依次加入待测标本、标准品等试剂和辣根过氧化物酶标记的检测抗体,经过孵育和洗涤后,用底物显色。TMB在HRP的催化下会变成蓝色,并在酸的作用下最终变成黄色。孵育完成后,用酶标仪在450nm波长下测定溶液吸光度值(OD值),结合标准曲线计算样品浓度。
四、竞争法ELISA
竞争法的原理基于抗原与抗体之间的结合反应。当待测样本中的抗原和已知浓度的标准抗原同时与抗体反应时,它们之间会形成竞争关系。由于抗原与抗体结合的亲和力不同,待测样本中的抗原会与抗体结合,而标准抗原也会与抗体结合。但是,如果待测样本中的抗原浓度过高,它会占据更多的抗体,从而减少标准抗原与抗体的结合机会。因此,通过检测反应产物,可以推算出待测样本中抗原的浓度。